鏈霉蛋白酶；蛋白酶E

簡(jiǎn)介：鏈霉蛋白酶E（Pronase E）是一種從灰色鏈霉菌中提取的蛋白水解酶混合物。它有能力將蛋白質(zhì)分解成單個(gè)氨基酸，使其適合廣泛的蛋白質(zhì)降解。鏈霉蛋白酶E至少包含細(xì)胞外絲氨酸蛋白酶在內(nèi)的三種蛋白酶活性。通常情況，絲氨酸蛋白酶縣廣譜的底物特異性，通過分子上一個(gè)天冬氨酸，一個(gè)組氨酸，和一個(gè)絲氨酸組成的活性位點(diǎn)來調(diào)控。本酶選擇性偏好水解谷氨酸或天冬氨酸羧基形成的肽鍵，常見的絲氨酸活性位點(diǎn)抑制劑可抑制其活性，如PMSF和DFP。鏈霉蛋白酶E還至少包含三種酪蛋白水解活性和一種氨基肽酶活性，這三種酪蛋白水解酶分別命名為灰色鏈霉菌來源蛋白酶A（Streptomyces griseus Protease A），蛋白酶B（Steptomyces gtniseus ProteaseB）和胰酶（Streptomyces gfiseus Typsin）。

別名：Pronase E；鏈絲菌蛋白酶E

物理性狀及指標(biāo)：

外觀：……………………白色至微褐色粉末

溶解性：…………………DMSO：50 mg/mL；Water：10 mg/mL

酶活力：…………………＞7000U/g

【酶活力定義：1g固體酶粉（或1ml液體酶），在30℃±0.2℃、pH7.5條件下，1min水解酪蛋白產(chǎn)生1μg酪氨酸，即為1個(gè)酶活力單位，以U/g（u/mL）表示。】

儲(chǔ)存條件：-20℃，避光防潮密閉干燥

運(yùn)輸條件：濕冰運(yùn)輸（按季節(jié)）

產(chǎn)品用途: 科研試劑，嚴(yán)禁用于人體。

鏈霉蛋白酶E的應(yīng)用廣泛，可應(yīng)用于蛋白的大量或者完全降解、蛋白酶抑制劑的研究、熱失活動(dòng)力學(xué)、核酸分離、與膠原酶和胰蛋白酶聯(lián)合組織消化、以及用于糖肽生產(chǎn)的糖蛋白純化等。

消化蛋白：（僅供參考）

1、儲(chǔ)存液制備：溶解于去離子水，配制成5-20mg/mL的Pronase E儲(chǔ)存液，若用于DNA或RNA分離步驟，建議將溶液56℃加熱處理15min，之后37℃孵育1h，此步驟能促使酶發(fā)生自消化，以去除DNase和RNase污染。之后將儲(chǔ)存液分成單次用量，-20℃凍存，通常情況1年穩(wěn)定。

2、DNA分離：直接加入DNA制備體系（含有0.5-1%SDS以打破DNA-蛋白相互作用），典型Pronase E工作濃度范圍250-500μg/mL，于37℃孵育1-4h。【注意：建議工作濃度范圍在250-2000μg/mL，依照具體情況而定】

3、蛋白水解：溶解約0.2μM蛋白到0.2mL 50mM碳酸氫銨緩沖液，pH8.0（或磷酸鹽緩沖液，pH7.0），之后按照1%（w/w）加入Pronase E，于37℃孵育24h。根據(jù)情況，有可能需要添加4%（w/w）氨肽酶M，并于37℃再孵育18h。